間充質(zhì)干細胞無(wú)血清培養基是 為擴增從骨髓、臍帶血或脂肪組織提取的人類(lèi)間充質(zhì)干細胞（human mesenchymalstem cells, hMSC)而設計的無(wú)血清培養基。該培養基化學(xué)成分明確，所有組分為化學(xué)合成或重組純化的蛋白，并且無(wú)異源蛋白，不含直接從任何動(dòng)物組織提取成份。因此它 不存在批間誤差和潛在的動(dòng)物源性病原體。如果配合使用特定的培養板（見(jiàn)下)，還可以省去鋪板的工序和時(shí)間，免去鋪板膠的費用。

Excell CB031-0081 / Human MSC medium, chemically-defined 的產(chǎn)品信息
基礎培養基 450ml ?2-8℃避光 可以保存6個(gè)月
添加物 50ml ?-80℃避光，避免反復凍融可以保存 6個(gè)月

Excell CB031-0081 / Human MSC medium, chemically-defined 的使用方法
一 培養基配制：
1. 過(guò)夜2‐8°C解凍添加物。
2. 無(wú)菌條件下配制100ml間充質(zhì)干細胞無(wú)血清完全培養基。
3.如果需要也可加入抗菌素（自選)。
配制好的間充質(zhì)干細胞無(wú)血清完全培養液（包含基礎培養基、添加物、谷氨酸鹽）2-8°C 避光保存，保存期1 個(gè)月。
二 培養基的使用：
培養于其它無(wú)血清或有血清培養基的MSCs 可以快捷方便地轉換到本品中培養。多數情況下，生長(cháng)狀態(tài)良好的MSCs直接換液為本品即可。個(gè)別情況下，可能需要逐步轉換。
三 hMSCs細胞的復蘇：
1.37°C水浴快速復蘇凍融細胞。
2.將細胞轉移到無(wú)菌50ml離心管中。
3.逐滴向裝有1ml細胞液的離心管中加入10ml預先復溫的間充質(zhì)干細胞無(wú)血清完全培養基，注意邊加邊輕輕晃動(dòng)離心管。
4.將上述混合溶液轉移到細胞培養瓶或細胞培養板中。
5.在5%CO2，37°C培養箱中靜置培養。
6.培養24h，換液。
7.此后每隔2天換液，直到傳代培養。
四 傳代培養：
如果使用特定的細胞培養板，如BD PrimariaTM 系列產(chǎn)品或Corning CellBINDTM 系列產(chǎn)品，那么使用本產(chǎn)品培養間充質(zhì)干細胞是不需要預先鋪板。傳統的細胞培養瓶和培養板是否無(wú)需鋪板正在評估中。對于那些還沒(méi)有被評估的產(chǎn)品或不適用于不 預先鋪板工序的產(chǎn)品，推薦使用人纖維連接蛋白（Fibronectin)進(jìn)行鋪板。
1.在鏡下觀(guān)察（使用本產(chǎn)品或其它培養基)細胞，確定傳代的時(shí)間，推薦在細胞量達到70%滿(mǎn)的時(shí)候傳代，不要讓細胞超過(guò)80%滿(mǎn)！
2.預先將0.05%胰酶/0.53mM EDTA和間充質(zhì)干細胞無(wú)血清完全培養基復溫到37°C待用。
3.用移液槍吸走舊培養基。
4.用DPBS洗一遍（自選)。
5.加入0.05%胰酶/0.53mM EDTA液以覆蓋住細胞表面，推薦室溫消化細胞（消化液用量：6孔板每孔約10cm2加入0.5ml，25cm2培養板加入1ml)。
6. 鏡下觀(guān)察細胞，當看見(jiàn)細胞開(kāi)始從培養板底脫離，輕輕敲擊培養板邊緣幫助細胞脫落。消化時(shí)間為1‐3分鐘。
7. 加入2倍于消化液體積的間充質(zhì)干細胞無(wú)血清完全培養基，將細胞懸液收集于15ml離心管中。
8.1200rpm離心10分鐘。
9.盡量棄去離心后的上層清液。用間充質(zhì)干細胞無(wú)血清完全培養基重懸細胞。此時(shí)可取細胞懸液進(jìn)行細胞計數。
10.按照3-5X103/cm2密度接種細胞。
11.5%CO2，37°C培養箱中培養。
12.每隔2天換新鮮的間充質(zhì)干細胞無(wú)血清完全培養基。
13.當細胞生長(cháng)達到70%滿(mǎn)時(shí)，傳代（一般每隔3-4天)。
五 凍存細胞：
1.配制細胞凍存液。
2.離心分離細胞，用凍存液重懸細胞。
3.將凍存管轉移到凍存盒中，置于-80°C冰箱過(guò)夜。
4.將細胞轉移到液氮罐中長(cháng)期貯存。

Excell 間充質(zhì)干細胞無(wú)血清培養基 031-0081 產(chǎn)品英文描述
Serum free medium for amplification of extracted from bone marrow, umbilical cord blood and adipose tissue of human mesenchymal stem cells, mesenchymal stem cells (human mesenchymalstem cells, hMSC) of serum free medium and design. The culture medium composition clearly, all components for chemical synthesis and purification of recombinant protein, and no heterologous protein, containing no ingredients directly from any animal tissue. Therefore, it does not exist between errors and the potential of animal pathogens. If used in conjunction with the culture plate specific (see below), but also can save time and planking, relieve the cost of glue.
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